Terdapat berbagai bahan lami yang berpotensi anti-diabetic; salah satunya adalah jeruk limau atau Citrus amblycarpa. Penelitian ini bertujuan untuk mengeksplorasi aktivitas anti-diabetes dan kandungan fitokimia kulit jeruk nipis. Penelitian ini adalah penelitian eksperimental yang menggunakan post-test only control group design. Kulit jeruk limau yang dikumpulkan dari pasar buah Berastagi di Medan, Sumatera Utara diekstraksi menggunakan etanol 70% dengan metode maserasi. Skrining fitokimia mengidentifikasi adanya fenolik, steroid / triterpenoid, terpenoid, saponin, flavonoid, tanin, dan alkaloid. Sementara itu, aktivitas anti-diabetes kulit jeruk nipis dievaluasi menggunakan enzim α-glukosidase yang diperoleh dari Saccharomyces cerevisiae dengan metode penghambatan enzim α-glukosidase. Persen penghambatan dinyatakan sebagai Mean ± SD dan dianalisis dengan One Way ANOVA, Tukey HSD Post Hoc Test, dan diikuti oleh regresi linier. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ada perbedaan yang signifikan dalam persentase penghambatan enzim α-glukosidase pada setiap konsentrasi, dengan nilai IC50 sebesar 125,93 ± 9,14 μg / mL. Kandungan fitokimia kulit jeruk limau adalah flavonoid, fenol, steroid / triterpenoid, dan alkaloid. Oleh karena itu, kulit jeruk limau memiliki aktivitas anti-diabetes dengan menghambat enzim α-glukosidase.